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高铁血红蛋白还原试验

1 拼音

gāo tiě xuè hóng dàn bái hái yuán shì yàn

2 英文参考

Methemoglobin reduction test

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3 概述

正常人血清中无高铁血红蛋白,血清中出现高铁血红蛋白,提示血管内溶血

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4 检查名称

高铁血红蛋白还原试验

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5 分类

临床血液检查 > 红细胞

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6 化验取材

血液

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7 高铁血红蛋白还原试验的原理

正常血红蛋白是亚铁血红蛋白,可被亚硝酸氧化为高铁血红蛋白。当红细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢-6-磷酸脱氢酶含量正常时,通过戊糖循环形成的还原型辅酶Ⅱ可作为血液中高铁血红蛋白还原酶的辅酶,并在递氢体美蓝的参与下,使形成的高铁血红蛋白还原为亚铁血红蛋白。当红细胞内缺少葡萄糖-6-磷酸脱氢-6-磷酸脱氢酶时,则高铁血红蛋白不能被还原。高铁血红蛋白为暗灰色,在630~650nm波长处吸光度最高,故可加以测定。

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8 试剂

(1)12.5g/L亚硝酸钠-葡萄糖溶液:取亚硝酸钠1.25g,葡萄糖5g,蒸馏水加至100ml。

(2)0.0001mol/L美蓝溶液:取美蓝0.15g,蒸镏水加至100ml。

(3)0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4):称取磷酸氢二钠Na2HPO4·12H2O)51mg。磷酸二氢钾52.2mg,加蒸馏水至100ml。

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9 操作方法

(1)静脉取血1.5~2.0ml,加于含有3.8%柠檬酸钠抗凝剂的小试管内,血液和抗凝剂接9∶1混合,加葡萄糖20mg。

(2)将此标本离心沉淀5min(1000r/min)或放置4℃冰箱过夜,待红细胞下沉后吸去部分血浆,使红细胞与血浆比例约为1∶1(相当红细胞比容35%~40%)。

(3)摇匀后取此血液1ml,加12.5g/L,亚硝酸钠-葡萄糖溶液和0.0001mol/L美蓝溶液各0.05ml,颠倒混合15次,使与空气中氧气充分接触,加塞,置于37℃水浴(或保温箱)3h。

(4)取出后摇匀,吸取此液0.1ml,加于0.02mol/L磷酸盐缓冲液10ml中,2min后于波长634nm处比色,测其吸光度为S

(5)吸取未加上述试剂但同样保温的血液0.1ml,加于0.02mol/L磷酸盐缓冲液10ml中,2min后按上法进行比色,测其吸光度为B,再于此液内加12.5g/L亚硝酸钠-葡萄糖溶液1滴,摇匀,5min后用同样方法测其吸光度为St。

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10 正常值

定性阴性

定量:还原率>75%。

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11 化验结果临床意义

(1)阳性:葡萄糖-6-磷酸脱氢-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺乏症、纯合子型、中间反应为杂合子型。

(2)定量<30%:G-6-PD缺乏症纯合子型。

(3)定量74%~31%:G-6-PD缺乏症杂合子型

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12 附注

(1)受检者红细胞比容对结果有一定影响,比容低于30%时,高铁血红蛋白还原率可明显降低故贫血患者应先调整红细胞比容后再测定。

(2)抗凝剂以38g/L柠檬酸钠或输血时用的抗凝剂ACD为好,血液标本可保存1周左右。肝素抗凝也可用(每毫升血液用肝素0.5mg),但标本只能保存3天。草酸盐抗凝不适于本法。

(3)ACD抗凝剂量不宜太多,血液与ACD抗凝剂按1∶0.15混合即可,否则可因pH降低,而使高铁血红蛋白还原速度减慢,以致出现假阳性

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